环境因子对赶黄草种子萌发的影响

采用单因素试验设计,通过对赶黄草种子进行不同温度、土壤水分含量及光照强度的处理,研究了温度、土壤水分、光照对赶黄草种子萌发特性的影响,找到促使该种子萌发的最适环境因子。结果表明,影响赶黄草种子萌发的环境因子最适宜范围分别是:温度10~15℃、土壤水分55%、光照强度100%。该试验结果对赶黄草种苗培育具有直接指导的现实意义。     

手掌参中赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白基因的表达、纯化及鉴定

目的: 构建含赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白基因(gcgasa)的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达。材料：手掌参。方法：设计带有EcoR I和Hind III酶切位点的引物,分别对gcgasa基因编码区全长及信号肽缺失的片段进行PCR扩增,将目标片段克隆入原核表达载体pET-32(a),构建重组质粒。经测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并采用SDS-PAGE、Western-blotting、电镜超薄切片技术检测外源蛋白的表达及定位情况。对于水溶性蛋白,采用Ni2+-NTA亲和层析及凝胶过滤手段纯化。结果: 含有信号肽的外源基因在大肠杆菌周质空间中以包含体形式存在,而信号肽缺失的片段主要以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化可获得目的蛋白。结论：首次在原核表达系统中高效表达了水溶性的gcgasa蛋白,为其结构和功能的研究奠定了基础。     

幽门螺杆菌热休克蛋白B亚单位基因HspB转化烟草的研究

幽门螺杆菌被世界卫生组织认定为一类致癌因子,其热休克蛋白(HSP)具有较强的免疫原性,存在着发展为疫苗成分的可能性.四川省农科院生物技术核技术研究所构建了幽门螺杆菌热休克蛋白B亚单位基因HspB植物表达载体pYHWHRI并转化进入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,EHA105).本文采用农杆菌介导的叶盘法对烟草(Nicotiana tabacum L.)叶片进行遗传转化.在含有卡那霉素(Kan)的MS筛选分化培养基上筛选,获抗性烟草植株.经PCR分子检测,其中6株已成功导入HspB基因.     

马铃薯单细胞60Co-γ辐射诱变的初步研究

采用60Co-γ辐射处理马铃薯单细胞,快速高效获得马铃薯突变体材料,为丰富马铃薯育种材料提供支持。以紫色马铃薯‘黑美人’试管苗和块茎2种外植体为材料,进行愈伤组织诱导和继代培养并建立细胞悬浮培养系。以紫色马铃薯‘黑美人’单细胞为辐射材料,采用5个剂量的60Co-γ射线辐射处理,观察比较不同辐射处理条件下单细胞的再生率。结果表明：经过10 Gy的60Co-γ辐射处理后,有一定数量的再生植株产生,20 Gy的60Co-γ辐射处理后,植株再生慢,再生率低。经过40Gy、60 Gy的60Co-γ辐射处理后无再生植株。细胞核制片观察结果表明：通过30天的再生培养后,细胞核的外形有明显的变化,10 Gy的辐射处理对细胞核的影响仍明显低于20 Gy,说明60Co-γ辐射处理单细胞引起的诱变具有一定的稳定性,有望获得到马铃薯突变体材料。     

欧山羊草高分子谷蛋白亚基向小麦的转入及其遗传规律

欧山羊草具有两个容易用聚丙烯酰胺凝胶电泳与小麦区别的高分子谷蛋白亚基,分别命名为Glu-Aeb1和Glu-Aeb2。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法对21份欧山羊草与小麦杂交后代BC2F6和15份BC2F5与小麦杂交F0种子的谷蛋白亚基组成进行了鉴定。实验结果表明,36份材料全部都有欧山羊草高分子谷蛋白亚基的转入。Glu-Aeb1在BC2F6和杂交组合F0中的传递频率分别为59.52%和20.94%。而Glu-Aeb2在BC2F6和杂交组合F0中的传递频率分别为40.48%和22.96%。     

小麦抗白粉病基因来源及抗性评价的研究进展

小麦白粉病是小麦生产的主要病害之一,应用抗病品种是防治该病十分经济、有效的措施。目前为止,小麦基因组中有41个位点的56个抗白粉病基因被标记和作图。本文详细叙述了小麦抗白粉病基因的来源及抗病基因利用,旨在为我国抗小麦白粉病分子育种提供参考。     

小麦品系CH7034中耐盐QTL定位

鉴定小麦耐盐种质对于充分利用盐碱地和保障粮食安全具有重要意义。CH7034是本实验室自育的1份小麦耐盐品系,为了明确其耐盐性遗传规律和控制位点,利用CH7034与盐敏感品种SY95-71的重组自交系群体进行QTL分析。基于SNP芯片数据和盐害指数(salt injury index),在2A、2D、4B和5A染色体上共检测出6个QTL,分别为QSI.sxau＿2A、QSI.sxau＿2D、QSI.sxau＿4B.1、QSI.sxau＿4B.2、QSI.sxau＿5A.1和QSI.sxau＿5A.2。其中,QSI.sxau＿5A.1在3次盐胁迫试验中均能被检测到,具有最高的表型变异解释率(15.73%～20.18%),且不同于5AL染色体上已报道的其他耐盐位点。在QSI.sxau＿5A.1区间开发并整合了7个SSR标记,将LOD峰值进一步确定在SSR-D1处。基于转录组数据库,从QSI.sxau＿5A.1区段内筛选了12个响应盐胁迫的高置信基因。研究结果为CH7034耐盐位点的精细定位乃至克隆奠定了基础,也为小麦耐盐品种选育提供了新种质和分子标记。     

氮肥施用量及施用时期对小麦品质性状的影响

为了探明不同氮肥运筹对西南麦区小麦品质性状的影响,以小麦品种(系)R210和川农25为材料,采用2因素3水平随机区组设计研究了施氮量及施氮时期对小麦品质性状的影响.结果表明,蛋白质及其组分含量、干面筋含量、沉淀值和稳定时间、粉质质量指数均随施氮量的增加而提高.施氮时期对品质性状的影响表现为:全施底肥有利于提高沉淀值、粉质质量指数及醇溶蛋白含量;采用底肥∶三叶期肥=1∶1的方式有利于提高GMP含量;采用底肥∶三叶期肥∶孕穗期肥=5∶2∶3的方式,有利于提高干面筋的含量,降低弱化度.不同品种的优质栽培方式不同,R210以底肥∶三叶期肥∶孕穗期肥=5∶2∶3,施用纯氮18 g/m2品质最优,川农25以全施底肥,施用纯氮18 g/m2品质最优.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对张氏肝细胞DNA修复基因表达的影响

采用MTT法、Comet assay（彗星实验）和RT—PCR法研究了表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对DNA损伤剂卡莫司汀作用后张氏肝细胞的DNA损伤及相关修复基因表达的影响。结果表明：EGCG能阻止卡莫司汀所致张氏肝细胞的生长抑制,卡莫司汀单用对张氏肝细胞的IC50为43．31μg／mL,当用25μg／mL和50μg／mL的EGCG与卡莫司汀联用时,对张氏肝细胞的IC50分别提高至52．46μg／mL和46．65μg／mL。彗星分析结果表明,EGCG还能减小卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤,彗星Olive尾矩值由单用时的9．07±5．48降为联用时的6．02±2．46。EGCG还能使卡莫司汀所致张氏肝细胞的DNA修复基因mgmt和alkb的表达下降得到回升,卡莫司汀（20μg／mL）处理张氏肝细胞24h后,mgmt和alkb的mRNA水平（与外参0634-actin的比值）比未处理组明显下降（分别由0．451±0．041和0．356±0．120下降至0．323±0．046和0．046±0．017,p〈0．05或p〈0．01）,当EGCG与卡莫司汀联合处理24h后,二者的mRNA水平基本恢复到正常（p〉0．05）,与外参β-actin的比值分别为0．451±0．041和0．451±0．041。说明EGCG能保护卡莫司汀对正常肝细胞的DNA损伤,因为它能逆转卡莫司汀所致正常肝细胞内DNA修复酶基因mgmt和alkb的表达下降。     

表没食子儿茶素没食子酸酯增强卡莫司汀抗肿瘤作用的体外研究

采用MTT法及Comet assay(彗星实验分析方法)研究了表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）与卡莫司汀联用对人肺癌细胞A549的生长抑制率及DNA损伤的影响,结果表明：联合应用EGCG能降低卡莫司汀对人肺癌细胞A549的IC₅₀。卡莫司汀单用对人肺癌细胞A549的IC₅₀为187.46βμg/ml,当用无毒浓度25βμg/ml和50βμg/ml的EGCG与卡莫司汀联用时,卡莫司汀对人肺癌细胞A549的IC₅₀分别下降为139.56βμg/ml和154.02βμg/ml。EGCG还能增强卡莫司汀引起的人肺癌细胞A549 DNA的损伤,彗星尾矩值由单用时的19.02±14.60上升为联用时的33.07±10.47。结果说明EGCG能增强卡莫司汀对人肺癌细胞A549造成的DNA损伤,从而增强其抗肿瘤活性。